必赢·bwin(中国)唯一官方网站

羟基酪醇（HT）是一种多功能多酚，是一种强效的天然抗氧化剂。HT可以清除自由基以减少细胞的氧化，还具有抗癌、抗炎和抗微生物活性。羟基酪醇作为一种功能成分在化妆品、食品、，和营养品行业，并显示出强大的市场价值。

2023年10月，湖北大学陈守文教学团队在Green Chemistry上发表了题为“Systematic metabolic engineering of Bacillus licheniformis for hyperproduction of the antioxidant hydroxytyrosol”的考究论文。该团队以地衣芽孢杆菌为生产宿主，通过蛋白质工程、道路优化、辅因子工程和补料分零售酵，以葡萄糖为碳源从头合成羟基酪醇，产量达9475 mg /L。

1.建立HT生物合成的人工途径

，在地衣芽孢杆菌成立羟基酪醇合成门路。通过大肠杆菌的HpaB和HpaC基因导入、Ehrlich门路引入、KivD蛋白质工程，从酪氨酸开始，产生113±14 mg /L的HT，从葡萄糖开始，产生21±4 mg/ L的HT。

2.增强莽草酸途径并阻断竞争途径以提高HT产量

将多的碳通量引导至HT生产，进行了增强PEP提供、排除反馈按捺/按捺和阻断比赛途径的考究。始末aroK的过表达、删除pheA和hisC，删除dhbC和dhaS， HT抵达2078±121 mg /L。

3.鉴别和敲除酪醇降解途径

培植基中参加2 g/L酪醇时，DWc9n/pHY300菌株消耗110 mg/L酪醇，表明地衣芽孢杆菌不妨具有酪醇降解途径。始末一十四种脱氢酶筛选，表明adhA在酪醇降解途径中起着至关重要的功效，后续adhA敲除，HT滴度增补到2202±133 mg/L，没有酪醇积累。

4.调节糖运输系统以增加HT生产的碳通量

提高关键基因转录水均分，glcU、glcK和ptsG是DHT1菌株的18.8、47.4和0.22倍。改动糖转运体例降低了溢出代谢，HT产量最高3299±150 mg/L。

5. KivDVI和HpaBC表达水平的微调

差异强度的开动子调节基因kivDVI、hpaB和hpaC的表达水平，HT产量最高4650 ±229mg/L。

6. 菌株中新限速步骤的识别、消除、5L发酵

培植基中插足0.5 g/L的4-HPP时，HT滴度补充；而当补充0.5 g L−1莽草酸时，HT效价略有下降，合成4-HPP不妨是DHT17中的限速措施。TyrAM53I/A354V的额外拷贝被整合到DHT17中以增强TyrAfbr的表达， 菌株DHT21发生5908±268 mg/L的HT。其后增强E4P的提供， PP途径的关键基因过表达，菌株DHT23发生6299±271 mg/L的HT。菌株DHT23在5L发酵罐中进行补料分批，24小时后发生的HT量来到9475 mg/L。

原文链接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlelanding/2023/gc/d3gc01773g

作者：柏树