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甜茶苷（Rubusoside，Rub）为一种高甜的二萜苷，主要从蔷薇科（蔷薇科）的叶子中分离出来。几十年来，它一直被用作低热量的天然甜味剂，最近被发现是一种潜在的药物先导物。

这项考究中设计了一种全细胞生物催化剂，以实现甜菊醇在酿酒酵母中糖基化为Rub。主要运用蔗糖合酶构建UDP-Glucose重生体系，并与来自多个植物物种的差别UGT酶进行组合测试。在优化反映条件后，对SrUGT74G1中能够影响糖基化效率的残基进行定点诱变。S84A/E87A的双突变淘汰了中间体的积累，终极将1.27 g/L甜菊醇葡萄糖基化为0.45 ±0.06 g/L甜菊糖单苷和1.92 ±0.17 g/L Rub。无需供给额外的UDPG即可实现Rub生物合成的高效率。这项工作作为全细胞生物催化中多步糖基化反映的第一个例子，为改日二萜甜味剂的可扩展生产奠定了本原。

S. c. WAT11中导入UGT酶后，在含蔗糖的磷酸缓冲液中全细胞催化1.2 g/L底物甜菊醇，有少数产品发生；

进一步导入AtSUS3或SoSUS2，并在40%蔗糖中全细胞催化4 mM底物（1.2 g/L」，转化率提升，且SoSUS2成就更佳；转化成就与蔗糖浓度呈相关，怀疑SUS活性过低等导致；

后续连系UGT定点突变和催化前提优化，进一步提高了转化效率，淘汰中间体积累，1.27 g/L甜菊醇葡萄糖基化为0.45 ±0.06 g/L甜菊糖单苷和1.92 ±0.17 g/L Rub。

讨论：

1. SUS效率太低，在全细胞催化的高浓度细胞量和高蔗糖浓度下，使用了包含UGT突变、催化条件优化等，本领1.2 g/L的底物有效转化；

2. 未联络体内UDPG降解道路敲除等，且酵母自身蔗糖主要运用基因SUC2未被敲除，不能有效评估蔗糖至宗旨道路的成果；及糖苷转化率低与UDPG供给量偏低或SUS活性低是否有关。

原文链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jafc.1c04873

作者：yockoo