锐谈 「 NAR:Ago—gDNA介导的大肠杆菌基因组编辑工具
- 分类: 新闻动态
- 作者:
- 来源:
- 发布时间:2023-04-26 10:36
- 访问量:
加州理工大学StephenL Mayo课题组在Nucleic Acids Research发表了一篇题为 “Genome manipulation by guide-directed Argonaute cleavage” 的查究论文,探索pAgo是否可能成为一种新的DNA引导的基因组编纂工具。
验证CbAgo能够定向切割大肠杆菌的染色体造成DNA损伤,并诱导RecBCD依赖性染色体重组的爆发,作者先将一个“Chi-kanDR- Stop Codons -kanDR-kan C-terminus”表达盒插入到大肠杆菌lacZ基因组后,并设计gDNA靶向lacZ。当且仅当CbAgo切割DNA,RecBCD鉴别Chi位点,减弱其外切酶的切割活性,促进kanDR爆发重组删除“Stop Codons”序列,卡那霉素抗性基因收复功能,使菌株具有卡那抗性。作者发觉,添加三个或6个Chi位点的表达盒,RecBCD依赖性染色体重组的爆发的几率最大。
最后,作者利用CbAgo替换CRISRER-cas9看成反筛系统,与Lambda-Red重组联络。利用CbAgo切割未胜利发生同源重组双交换的细胞,使筛选突变细胞的效率升迁了100倍。这些发现说明了运用pAgo树立DNA导向基因组编纂系统的能够性。
原文链接:https://academic.oup.com/nar/article-lookup/doi/10.1093/nar/gkad188
作者:留白